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 大豆胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备及其检测试剂盒的研制
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文章作者：佚名 文章来源：本站原创 文章点击数： 更新时间：2006-9-1
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由中国农业大学农业部饲料工业中心和国家饲料工程技术研究中心联合完成的“大豆胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备及其检测试剂盒的研制”，于2003年4月3日通过教育部主持的科技成果鉴定（鉴字[教QP2003]第002号），项目成果总体达到国际先进水平。
本项目是在大豆饼粕需求激增、饲料生产及质量受到广泛关注、大豆制品广泛应用，而大豆胰蛋白酶抑制因子检测方法较薄弱的情况下立项研究的。项目主要针对大豆胰蛋白酶抑制因子具有抗营养作用，同时也具有抗原性和免疫原性的特点，运用免疫学的基本原理和细胞遗传学的技术手段，结合动物营养与饲料加工的实际，获得了高度特异性的大豆胰蛋白酶抑制因子抗体，从而开发其检测试剂盒。
项目运用细胞融合方法经过8次试验，共选择出4株能稳定分泌单克隆抗体的G2、B3、G4和F5细胞株。并用染色体计数和DNA含量鉴定融合结果，证明此细胞为两亲本细胞融合的产物。然后将阳性最强的G4株进行小鼠体内诱生扩增产生抗体，并对抗体的性质进行了检测，确定了以固定抗体的酶标抗原竞争法作为试剂盒的检测程序。在对检测条件进行优化的基础上, 确定了使用的酶标板、试剂盒包被、封闭、检测和试验样品处理等一系列条件，组装了大豆胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体检测试剂盒。最后对该试剂盒检测结果的精确性和准确性进行评估，其检测范围为0.01μg/ml～10μg/ml, 灵敏度为0.01μg/ml，板内变异系数为3.6%,板间变异系数为4.8%，批内变异系数为5.4%，批间变异系数为11.6%，其检测样品不同梯度的线性评估结果良好（R2=0.966）。并在实验室内进行了样品检测试验，与常规的酶化学检测方法相比，此方法省时、省力、结果直观性好、准确度高。
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